親愛的讀者們，今天我們聊一聊蛋白質印跡實驗中不可或缺的TBST和PBST緩沖溶液。它們雖然名字相似，但成分和用途卻有所不同。了解它們的特點和適用場景，對實驗成功至關重要。讓我們一起來探討，選擇最合適的緩沖液，助力實驗研究。

在蛋白質印跡實驗（Western Blot）中，TBST和PBST是兩種常用的緩沖溶液，但它們并非同一物質，下面，我們將深入探討兩者的區別和用途。

1、TBST的組成：TBST是TBS（Tris Buffered Saline）和Tween-20的縮寫，TBS是一種含有Tris-HCl、NaCl和Tween-20的緩沖溶液，常用于蛋白質印跡實驗中的洗滌步驟，TBS提供緩沖的pH值環境，而Tween-20則有助于蛋白質的洗脫。

2、PBST的組成：PBST是PBS（Phosphate Buffered Saline）和Tween-20的縮寫，PBS是一種含有NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4的緩沖溶液，其pH值通常為7.4，與細胞內的pH值相近，PBST在Western Blot實驗中也用于洗滌步驟，其作用與TBST相似。

3、兩者區別：雖然TBST和PBST都含有Tween-20，但它們的pH值和離子組成有所不同，在Western Blot實驗中，使用PBST時需注意，因為PBST中含有磷酸基團，可能會干擾磷酸化蛋白的檢測。

4、使用建議：在進行Western Blot實驗時，根據實驗需求選擇合適的緩沖溶液，檢測磷酸化蛋白時，建議使用TBST；而檢測非磷酸化蛋白時，可以使用PBST。

PBS緩沖液的配制是什么？

PBS緩沖液是生物學實驗室中常用的緩沖溶液之一，其配制方法如下：

1、原料：稱取磷酸二氫鉀（KH2PO4）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）、氯化鈉（NaCl）、氯化鉀（KCl）和吐溫-20。

2、配制步驟：

- 稱取KH2PO4 0.2g、Na2HPO4·12H2O 2.9g、NaCl 8.0g、KCl 0.2g和吐溫-20 1.0g。

- 將上述物質溶解于800mL蒸餾水中。

- 用HCl調節溶液至pH 7.4。

- 加蒸餾水定容至1L。

3、注意事項：

- 配制PBS緩沖液時，需注意精確稱量和溶解。

- 配制后的PBS緩沖液需儲存于4℃冰箱中，避免反復凍融。

PBST該如何配制？

PBST是PBS和Tween-20的混合溶液，其配制方法如下：

1、原料：稱取PBS緩沖液和Tween-20。

2、配制步驟：

- 將PBS緩沖液稀釋至所需濃度（1×PBS）。

- 稱取Tween-20，加入適量蒸餾水溶解。

- 將溶解后的Tween-20溶液加入PBS緩沖液中，混勻。

3、注意事項：

- PBST的配制過程中，需注意Tween-20的加入量，過量可能會影響實驗結果。

- 配制后的PBST溶液需儲存于4℃冰箱中，避免反復凍融。

請問PBS緩沖液如何配？謝謝

PBS緩沖液的配制方法如下：

1、原料：稱取KH2PO4、Na2HPO4·12H2O、NaCl、KCl和吐溫-20。

2、配制步驟：

- 稱取KH2PO4 0.2g、Na2HPO4·12H2O 2.9g、NaCl 8.0g、KCl 0.2g和吐溫-20 1.0g。

- 將上述物質溶解于800mL蒸餾水中。

- 用HCl調節溶液至pH 7.4。

- 加蒸餾水定容至1L。

3、注意事項：

- 配制PBS緩沖液時，需注意精確稱量和溶解。

- 配制后的PBS緩沖液需儲存于4℃冰箱中，避免反復凍融。

PBST配置，調節pH值是在加Tween之前，還是之后呢？

在配制PBST緩沖液時，調節pH值通常是在加入Tween-20之前，以下是具體步驟：

1、稱取原料：稱取KH2PO4、Na2HPO4·12H2O、NaCl、KCl和吐溫-20。

2、溶解物質：將KH2PO4、Na2HPO4·12H2O、NaCl和KCl溶解于800mL蒸餾水中。

3、調節pH值：用HCl調節溶液至pH 7.4。

4、加入Tween-20：將吐溫-20加入溶液中，混勻。

5、定容：加蒸餾水定容至1L。

6、儲存：將配制好的PBST緩沖液儲存于4℃冰箱中，避免反復凍融。

Western Blot基本原理及步驟

Western Blot，即蛋白質印跡法，是一種常用的蛋白質分析技術，以下是Western Blot的基本原理及步驟：

1、基本原理：Western Blot通過將目標蛋白從復雜的混合物中分離并定量檢測，以確定蛋白質的存在與表達水平。

2、操作步驟：

（1）蛋白質樣品獲得：根據實驗需求，獲取蛋白質樣品，細菌誘導表達后，可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞；真核細胞加勻漿緩沖液，機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min，4℃，13,000g離心15min，取上清液作為樣品。

（2）SDS-PAGE電泳：將蛋白質樣品進行SDS-PAGE電泳分離。

（3）轉膜：將分離后的蛋白質轉移到固相載體上，如PVDF膜或NC膜。

（4）封閉：將轉膜后的膜用封閉液（如5%脫脂奶粉）封閉，以防止非特異性結合。

（5）一抗孵育：將一抗（針對目標蛋白的抗體）加入封閉后的膜，進行孵育。

（6）洗滌：用TBST或PBST洗滌膜，去除未結合的一抗。

（7）二抗孵育：將二抗（針對一抗的抗體）加入洗滌后的膜，進行孵育。

（8）洗滌：用TBST或PBST洗滌膜，去除未結合的二抗。

（9）顯影：將膜與化學發光底物反應，觀察目標蛋白的表達水平。

3、注意事項：

- Western Blot實驗中，選擇合適的抗體和封閉液至關重要。

- 實驗過程中，需嚴格控制溫度和時間，以確保實驗結果的準確性。

- Western Blot實驗結果需結合其他實驗方法進行綜合分析。