N-2-羥乙基哌嗪-N'2-乙磺酸，通常被簡稱為HEPES，是一種優質的緩沖試劑。它是一種氫離子緩沖劑，擁有強大的pH控制能力，能夠在較長時間內維持穩定的pH范圍。

HEPES的pH緩沖范圍位于6.8至8.2之間。這種化學物質在其他的溶劑中較難溶解，但卻能輕易地溶解于水中，而且與多價金屬離子混合時，不會引發沉淀反應。

在細胞培養的過程中，HEPES緩沖液扮演著重要的角色。它是一種弱勢的緩沖劑，如果在開放式的培養環境中使用，加入HEPES可以幫助防止培養基內部的pH值因氧化而升高，從而使得pH值得以維持在約7.0的水平。

關于使用HEPES緩沖液的注意事項包括：

1. 配制實驗用溶液時，應使用純水，并且容器在使用前需用純水清洗三次以上。對于要求較高的實驗，應事先進行空白值檢測。

2. HEPES緩沖液必須存放在專用的帶塞試劑瓶中，對于對光線敏感、容易分解的溶液，應裝在棕色容器中。

3. 所有溶液都應標明名稱、規格、濃度和配制日期。

4. 由于HEPES可能對皮膚造成傷害，因此禁止直接接觸溶液。

5. 避免溫度的劇烈變化，以免導致溶液變質。為了獲得準確的分析結果，應做到隨用隨取。

關于HEPES緩沖液的配制方法：

一、為了制備500ml、1M的HEPES Stock Solution，pH值為7.0，我們需要將119.15g的HEPES溶解在400ml的蒸餾水中。接著，加入適量的0.5~1M的NaOH水溶液來調整所需的pH值（注意，HEPES的有效pH范圍是6.8~8.2）。然后，用蒸餾水將體積定容至500ml，最后在4攝氏度的環境下保存。

二、若要配制含有少量鹽的HEPES Buffer，我們需要稱取6.5g的HEPES、8.0g的NaCl和0.198g的Na2HPO4.7H2O，然后用0.5M的NaOH水溶液調整pH值，最后定容至所需體積。

三、對于2×HEPES緩沖鹽溶液的配制，我們將特定量的NaCl、KCl、Na2HPO4.2H2O、葡聚糖和HEPES溶解在90ml的蒸餾水中。然后，用0.5M的NaOH調整到所需的pH值，最后再用蒸餾水定容至100ml。

正確配置和使用HEPES緩沖液對于實驗的準確性和可靠性至關重要。實驗人員應遵循詳細的指南進行操作，確保緩沖液的質量和穩定性。根據實驗的具體需求，可以調整HEPES的配方和濃度，以滿足特定的實驗要求。值得一提的是，20mm HEPES是一種特定濃度的緩沖液，其濃度為20mmol/L。它是一種非離子兩性緩沖液，在pH7.2至7.4的范圍內展現出良好的緩沖能力。這種緩沖液常被用于體外診斷、DNA/RNA提取以及脂質體藥物等領域。由于其穩定性好且不易與其他物質產生沉淀反應，它能夠在較長時間內維持恒定的pH范圍。在細胞培養中，使用終濃度為10至25mmol/L的HEPES是常見的做法，而在某些特定情況下，使用20mmol/L的HEPES也是可行的選擇。