CTAB法即 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨),是一種陽(yáng)離子去污劑,具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。
CTAB法,是一種陽(yáng)離子去污劑,具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。
就CTAB法來(lái)說(shuō),由于以CTAB為變性劑,同時(shí)加入PVP和β一巰基乙醇共同作用變性蛋白、抑制RNase的活性,使用無(wú)水乙醇或異丙醇沉淀雜蛋白和總核酸等,然后再選擇性地分離出RNA。所以CTAB法是一種很好得總RNA得提取方法。
CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨),是一種陽(yáng)離子去污劑,具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。
CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化銨),是一種陽(yáng)離子去污劑,具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。
1、主要提一下CTAB法提取植物基因組DNA原理。
2、原理是DNA分子在260nm處有特異的紫外吸收峰,且吸收強(qiáng)度與DNA的濃度成正比。
3、原理不同:比較常規(guī)法是通過(guò)機(jī)械破碎和化學(xué)溶解的方式,破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,釋放DNA。而去多糖法則是通過(guò)去除多糖物質(zhì),如纖維素、半纖維素、果膠等,使細(xì)胞壁破壞得更加充分,從而釋放更多的DNA。
4、堿煮法提取植物DNA的原理是:高PH的溶液會(huì)使細(xì)胞壁粕類從而使得DNA和蛋白質(zhì)變性。
5、用苯酚處理勻漿液時(shí),由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶原理。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。氯仿:加速有機(jī)相與液相分層。
6、呃……能說(shuō)下具體的改動(dòng)部分嗎?一般來(lái)說(shuō),改良法是應(yīng)用于多年生植物組織的dna提取,含有較多的酚,多糖,硅質(zhì)等,棉花和水稻的dna提取也需要一定的修改。思路有兩個(gè),一方面盡量去除雜質(zhì)、蛋白和脂類,另一方面加強(qiáng)dna的沉淀效果。
1、將純化的DNA溶液用TE(pH0)稀釋至每毫升含5-50μg DNA濃度范圍,用TE(pH0)作空白對(duì)照,于紫外分光光度計(jì)上測(cè)定260nm、280nm和230nm吸收值,計(jì)算A260/A230和A260/A280的比值,并換算出核酸的含量。
2、DNA不溶于0.14mol/L 的NaCl溶液中,而RNA則能溶于0.14mol/L 的NaCl溶液之中,利用這一性質(zhì)就可以將二者從破碎細(xì)胞漿液中分開(kāi)。
3、.提取DNA (1)提取DNA所用的提取液、吸頭、離心管等需要在高壓滅菌鍋中121℃(約1 kg/cm2)高壓滅菌20 min。
4、紫外光吸收法:因?yàn)榻M成核酸的堿基,在260納米處具有強(qiáng)吸收峰,所以通過(guò)測(cè)定260納米的吸收峰,即可對(duì)DNA進(jìn)行定量。
(1) 2%CTAB抽提緩沖液在65℃水浴中預(yù)熱。
稱取0.1g左右的植物組織,放入2ml離心管,加入600ul的DNA提取緩沖液 (Buffer ①+Buffer②+Buffer③+Na2HSO3)。研磨徹底,65℃水浴50min,中間每隔15分鐘顛倒混勻一次。加入600ul的氯仿/異戊醇24:1,顛倒混勻。
液氮研磨樣品,加入700ulCTAB+20ul DTT,水浴65℃,15min,每5分鐘搖一次.4℃離心15min。取出離心管,每管加入等體積的酚氯仿,輕輕混勻(管內(nèi)液體分三層),2000rpm,15min,4℃。
主要提一下CTAB法提取植物基因組DNA原理。
步驟 (1) 2%CTAB抽提緩沖液在65℃水浴中預(yù)熱。(2)取少量實(shí)驗(yàn)材料(約300mg)置于研缽中,用液氮磨至粉狀。(3) 加入700ul的2%CTAB抽提緩沖液,輕輕攪動(dòng)。