一、DNA片段的互補黏性末端連接

對于具有互補黏性末端的DNA片段，連接反應主要依賴DNA連接酶的催化。例如，E.coli DNA連接酶以及廣泛應用的T4 DNA連接酶。當兩個DNA片段的末端由同一種限制性內切核酸酶切割時，連接后仍保留原有的識別序列。但如果使用兩種同尾酶切割產生的互補黏性末端，雖然可以有效連接，但重組的DNA分子通常會失去這兩種酶的識別序列。

二、DNA平末端片段的連接

平末端DNA片段的連接則主要依賴T4 DNA連接酶。只要兩個DNA片段的末端是平末端，無論是由何種限制性內切核酸酶切割還是通過其他方法產生，都可以進行有效連接。若使用兩種不同限制性內切核酸酶切割產生的平末端DNA片段進行連接，連接后的DNA分子會失去這兩種酶的識別序列。而如果使用同一種限制性內切核酸酶切割產生的平末端DNA片段，連接后的DNA分子將保留該酶的識別序列，有時甚至會出現新的限制性內切核酸酶識別序列。

三、DNA片段末端的修飾與連接

當待連接的DNA片段末端不是互補黏性末端或平末端時，需要進行末端修飾。這通常通過核酸外切酶將黏性末端修飾成平末端，或使用末端脫氧核苷酸轉移酶修飾平末端成互補黏性末端。有時為了避免DNA片段自行連接成環形或二聚體，會使用堿性膦酸酯酶修飾其中一種DNA片段的5′-P為-OH。

四、添加連桿后的DNA連接

對于既無互補黏性末端又無平末端的兩種DNA片段，除了上述的末端修飾連接方法外，還可以通過人工合成的連桿或銜接頭進行連接。先將連桿連接到待連接的DNA片段末端，然后使用合適的限制性內切核酸酶切割連桿，使待連接的DNA片段具有互補黏性末端，最后在DNA連接酶的催化下進行連接。也可以根據DNA片段的末端選擇合適的銜接頭直接進行連接。

以下是關于兩種主要DNA連接酶的介紹：

1. E.coli DNA連接酶：此酶來自大腸桿菌，具有催化DNA基本骨架磷酸二酯鍵形成的功能。它主要連接具有相同黏性末端的DNA分子，對平末端的效果則不佳。

2. T4 DNA連接酶：這是一種單鏈多肽酶，分子量為68,000道爾頓。它能在正常條件下催化雙鏈DNA上相鄰的3′羥基和5′磷酸末斷形成磷酸二脂鍵。

在粘性末端DNA片段的連接中，DNA連接酶能夠催化外源DNA和載體分子之間的連接作用，形成重組的DNA分子。而平末端DNA片段的常用連接方法包括同聚物加尾法、銜接物連接法及接頭連接法等。

以上內容僅供參考，如需更多信息，建議查閱生物化學相關書籍或咨詢生物學專家獲取。您好，

（1）E·coli DNA連接酶，來源于大腸桿菌，可用于連接粘性末端；

（2）T4DNA連接酶：來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率低。

（3）熱穩定的DNA連接酶（thermostableDNAligase），是從嗜熱高溫放線菌（Thermoactinomycesthermophilus）菌株中分離純化的，一種能夠在高溫下催化兩條寡核苷酸探針發生連接作用的一種核酸酶。